SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)技術(shù)手冊

1. 產(chǎn)品概述

SDS-PAGE 蛋白上樣緩沖液 (5×, Reducing Protein Loading Buffer) 是一種經(jīng)過高度濃縮的常規(guī)蛋白電泳專用預混液。本產(chǎn)品含有高濃度的還原劑（如 DTT 或 β-巰基乙醇），專門用于在電泳前破壞蛋白質(zhì)的二硫鍵并使其變性。

本產(chǎn)品由高純度 SDS、甘油、溴酚藍、Tris-HCl 緩沖系統(tǒng)及強效還原劑精確配制而成。5 倍濃縮的設(shè)計能夠最大限度減少上樣緩沖液的體積占比，從而允許加載更高容量的蛋白樣品，顯著提高低豐度蛋白的檢測靈敏度。

2. 作用機理

本產(chǎn)品通過多重效應(yīng)確保蛋白質(zhì)按分子量大小精確分離：

• 變性與還原： 組分中的還原劑高效打開蛋白質(zhì)分子內(nèi)部及分子間的二硫鍵；SDS 與熱處理協(xié)同作用，破壞蛋白質(zhì)的二級、三級結(jié)構(gòu)，使其展開成線性肽鏈并帶上等密度的負電荷。

• 增加樣品密度： 甘油 賦予樣品較高的比重，使其能夠穩(wěn)定沉降于加樣孔底部，防止樣品溢出或擴散至電泳緩沖液中。

• 指示前沿： 溴酚藍 作為靈敏的電泳指示劑，其遷移速率通?？煊诮^大多數(shù)蛋白質(zhì)，便于實驗人員實時監(jiān)控電泳進度。

• pH 穩(wěn)定： Tris-HCl 緩沖系統(tǒng)將樣品 pH 穩(wěn)定在 6.8 左右，與濃縮膠環(huán)境一致，確保蛋白質(zhì)進入分離膠前被壓縮成窄帶。

3. 產(chǎn)品核心優(yōu)勢

• 還原能力強： 含有足量的還原組分，確保即便對于富含二硫鍵的復雜蛋白樣本，也能實現(xiàn)線性化分離。

• 高濃縮、高載量： 5× 設(shè)計可騰出更多加樣體積，是稀釋樣本或低表達蛋白檢測的理想選擇。

• 條帶銳利清晰： 選用電泳級超純原料，有效避免由于雜質(zhì)導致的條帶彌散、拖尾或非特異性污染。

• 即開即用： 省去繁瑣的組分配稱和 pH 調(diào)節(jié)過程，顯著降低實驗間的操作誤差，提升數(shù)據(jù)重復性。

• 廣泛兼容： 適配于各類商業(yè)預制膠及實驗室自制凝膠體系。

4. 廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域

• 常規(guī) SDS-PAGE： 蛋白質(zhì)樣本的分子量鑒定、純度分析。

• Western Blot： 免疫印跡前的樣本變性處理。

• 蛋白質(zhì)組學： 復雜組織裂解液、細胞提取物的電泳分離。

• 抗體結(jié)構(gòu)研究： 還原條件下分析抗體的重鏈（~50 kDa）與輕鏈（~25 kDa）。

5. 技術(shù)參數(shù)規(guī)格 (Specifications)

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6. 使用方法

1. 混合： 取 1 體積本產(chǎn)品與 4 體積蛋白質(zhì)樣本混合（例如：40 μL 樣本加入 10 μL 上樣緩沖液）。

2. 變性： 充分混勻后，置于 95°C - 100°C 沸水浴或金屬浴加熱 5-10 分鐘。

3. 瞬離： 冷卻至室溫后，短時間離心數(shù)秒，收集管蓋上的冷凝液。

4. 上樣： 直接取適量混合液加入電泳凝膠孔中進行電泳。

7. SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(5X)注意事項與質(zhì)量承諾

• 安全提示： 本產(chǎn)品含有還原劑（具有特殊氣味），操作時請在通風環(huán)境中進行，并佩戴手套。

• 沉淀處理： 若在低溫保存下出現(xiàn) SDS 析出，請室溫放置或溫水浴輕微加熱溶解后使用。

• 質(zhì)量承諾： 每一批次產(chǎn)品均經(jīng)過標準蛋白電泳驗證。我們承諾：本產(chǎn)品還原、背景潔凈、條帶分辨率高，為您的蛋白研究提供優(yōu)秀數(shù)據(jù)表現(xiàn)。