帶你認(rèn)識(shí)流式細(xì)胞術(shù)PART 2
更新時(shí)間：2025-11-28
瀏覽次數(shù)：297
一、流式圖
流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞都是高速的，目前分析速度基本都能達(dá)到每秒上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，每個(gè)分析的細(xì)胞都能得到幾方面的信息，最基本的有FSC、SSC信號(hào)，如果再標(biāo)記熒光素偶聯(lián)抗體，就會(huì)再增加多個(gè)熒光信號(hào)。為了全面直觀反映大量信息，就得采用流式圖來(lái)顯示。
流式圖有很多種，常用的是流式直方圖和散點(diǎn)圖，當(dāng)然還有等高線圖等等。
流式直方圖只能顯示一個(gè)通道的信息，散點(diǎn)圖能顯示兩個(gè)通道的信息，相關(guān)分析軟件中甚至有能顯示三通道信息的3D圖。
流式直方圖
流式直方圖形成的原理與統(tǒng)計(jì)學(xué)中直方圖相似。其x軸表示一個(gè)通道的值，y軸表示細(xì)胞數(shù)量或者信號(hào)強(qiáng)度等等。
例：上圖中x軸表示FSC信號(hào)值，y軸表示位于各區(qū)間的細(xì)胞數(shù)
從上圖可以看出，根據(jù)FSC信號(hào)值的大小（即細(xì)胞體積），可以將上述細(xì)胞分為兩群：一群細(xì)胞的大小平均在35左右，占62%；第二群細(xì)胞的大小平均在95左右，占38%。
得出結(jié)論：這100個(gè)細(xì)胞由大小明顯不同的兩群細(xì)胞組成，并且小細(xì)胞占多數(shù)。
流式直方圖雖不是如此簡(jiǎn)單，但基本原理是相同的。流式直方圖在統(tǒng)計(jì)直方圖的基礎(chǔ)上，使統(tǒng)計(jì)區(qū)間不斷的縮小，小到甚至可以認(rèn)為一個(gè)值就是一個(gè)統(tǒng)計(jì)區(qū)間，而細(xì)胞數(shù)量不斷增加，致使相鄰區(qū)間內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量差不多，這時(shí)直方圖就好像是由光滑的曲線所圍成的。
檢測(cè)值與實(shí)際值差異
性質(zhì)相同的一個(gè)細(xì)胞群在流式直方圖中是以正態(tài)分布曲線的形式出現(xiàn)的，其原因是流式檢測(cè)值與實(shí)際值之間存在著一定的誤差。
在大樣本條件下，檢測(cè)值與實(shí)際值相符或者偏離實(shí)際值越小的概率越大，而檢測(cè)值偏離實(shí)際值越大的概率越小，反映在流式直方圖上就表現(xiàn)為正態(tài)分布的圖形。
流式散點(diǎn)圖
流式散點(diǎn)圖能夠同時(shí)表示兩個(gè)通道的信息。x軸、y軸分別表示兩個(gè)不同通道的值，圖中每個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞，該點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的橫縱坐標(biāo)即為該細(xì)胞兩個(gè)通道的信號(hào)值。
FSC-SSC散點(diǎn)圖
常見(jiàn)的即為FSC-SSC散射光通道散點(diǎn)圖，x軸：FSC代表細(xì)胞的大小，y軸：SSC代表細(xì)胞的顆粒度/形狀。該圖可以初步根據(jù)細(xì)胞的大小、顆粒度對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分群、分類(lèi)，所以該圖又可以稱(chēng)為細(xì)胞的“物理圖"。
例：上圖代表的是正常人外周血白細(xì)胞FSC-SSC散點(diǎn)圖?？梢钥闯?，細(xì)胞大致分為三群：紅色的是淋巴細(xì)胞（T、B、NK細(xì)胞等）、綠色的是單核細(xì)胞群、黃色的是中性粒細(xì)胞群。
門(mén)（gate）
門(mén)是流式分析中一個(gè)非常重要的概念，流式分析時(shí)有時(shí)不希望所有的樣品細(xì)胞都顯示于流式圖中，而希望只顯示感興趣的細(xì)胞，排除其他非相關(guān)細(xì)胞的干擾，使顯示的信息更加直觀、更具有針對(duì)性。
熒光信號(hào)散點(diǎn)圖
熒光通道表示的是細(xì)胞的化學(xué)特征。熒光通道接收到信號(hào)的強(qiáng)弱，可以反映細(xì)胞上結(jié)合的熒光素的量，進(jìn)一步反映細(xì)胞上表達(dá)某分子的量，最后間接反映細(xì)胞表達(dá)某分子這一化學(xué)特征。
注意：不同于FSC-SSC散點(diǎn)圖，F(xiàn)SC和SSC最多相差幾倍，而熒光信號(hào)強(qiáng)弱之間相差很大，陰陽(yáng)性細(xì)胞之間可以相差幾百、幾千倍，呈指數(shù)形式。所以，F(xiàn)SC-SSC散點(diǎn)圖單位數(shù)值以“一般數(shù)序形式"表示，而熒光通道常以“對(duì)數(shù)形式"表示。
在流式散點(diǎn)圖中，呈典型放射狀分布的圓形所代表的是性質(zhì)相同的細(xì)胞群，呈長(zhǎng)條形或者橢圓形的則表示該細(xì)胞群其中一個(gè)參數(shù)所代表的的化學(xué)性質(zhì)不相同，很可能存在著表達(dá)上的強(qiáng)弱差異。
但是，這里需要指出，通過(guò)流式散點(diǎn)圖判斷細(xì)胞群某一性質(zhì)是否存在差異不如通過(guò)流式直方圖判斷準(zhǔn)確，因?yàn)?，流式散點(diǎn)圖中的細(xì)胞群的形狀受影響的因素有很多，不僅表達(dá)強(qiáng)弱差異會(huì)影響，通道之間的熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)也會(huì)直接影響細(xì)胞群的形狀，從而使原來(lái)典型放射狀分布的圓形變成長(zhǎng)條形，流式分析時(shí)需要綜合考慮這些因素。
